Sắc ký cột là gì

  -  

Sắc cam kết (chromatography) là các phương thức đồ gia dụng lý nhằm tách riêng những chất vào một hỗn hợp phụ thuộc sự phân bổ khác biệt của chúng giữa trộn đụng với pha tĩnh.

Bạn đang xem: Sắc ký cột là gì


*

khi xúc tiếp cùng với pha tĩnh, các cấu tử của hỗn hợp hóa học nghiên cứu vẫn phân bố giữa trộn động cùng pha tĩnh tương ứng với đặc điểm của bọn chúng (tính bị hấp phụ, độ tan…). Các hóa học không giống nhau thì gồm ái lực khác nhau cùng với trộn rượu cồn và pha tĩnh.

Sắc ký điều chế (preparative sầu chromatography) là 1 trong những nghệ thuật phân tách tiên tiến được vận dụng để tách bóc hoặc làm tinch khiết các cấu tử có giá trị cao, hoặc các cặp đồng phân quang học tập nặng nề bóc tách bằng những cách thức không giống.

Phân biệt nhan sắc cam kết so với cùng sắc ký kết điều chế

Nếu nhỏng tín đồ ta cần sử dụng nhan sắc ký kết so với (Analytical Chromatography) nhằm định tính và định lượng các cấu tử bao gồm vào chủng loại phân tích thì dung nhan ký pha trộn giúp ta phân lập với tinh chế những cấu tử tự hỗn hợp ban đầu.

Đối với sắc ký đối chiếu những tiêu chuẩn nhỏng độ nhạy bén, độ đúng chuẩn của phương pháp là các tiêu chuẩn review tính năng của phương thức thì độ tinh khiết của sản phẩm, xác suất tịch thu dung môi cao, tiêu hao dung môi tối tđọc là các tiêu chí Review công dụng của cách thức nhan sắc cam kết pha chế.

cũng có thể phân loại sắc cam kết điều chế thành 3 các loại nlỗi sau:

1. Sắc ký kết lớp mỏng điều chế (Preparative sầu Thin layer Chromatography);2. Sắc ký cột pha chế (Preparative Column Chromatography);3. HPLC pha trộn (Preparative High Perfornace Liquid Chromatography).Xin ra mắt dưới đây phần đa điểm bao gồm độc nhất vô nhị về từng nhiều loại dung nhan cam kết điều chế.

1. Sắc cam kết lớp mỏng mảnh pha chế (preparative sầu thin layer chromatography)

Sắc ký kết lớp mỏng mảnh (thin layer chromatography - TLC) là 1 chuyên môn thường xuyên được sử dụng trong phòng thể nghiệm, vị nó chất nhận được xác minh nkhô nóng nhân tố của các phù hợp hóa học phức tạp. TLC rất có thể phân lập những chất tại một hàm lượng rất nhỏ tuổi với thường dùng làm so sánh các hóa học chiết ra tự thực thứ.

Sắc ký lớp mỏng manh pha trộn là phương pháp được thực hiện nhằm bóc tách một lượng bé dại đơn hóa học (10 - 1000 mg) xuất phát từ 1 tất cả hổn hợp dễ dàng và đơn giản (chỉ bao gồm một vài ba cấu tử).

1.1. Kỹ thuật sắc ký kết lớp mỏng mảnh điều chế

Trong nghệ thuật sắc đẹp cam kết lớp mỏng dính pha trộn, một hỗn hợp mẫu mã thử được chấm bên trên một phiên bản mỏng bao gồm tcố lớp hóa học tiêu thụ (hay là silica gel, nhôm oxyt) có độ dày từ 0,5 – 2,0 mm trên nền phẳng (kính, nhôm) gồm mục đích là một trong trộn tĩnh. Nhúng bạn dạng mỏng dính này vào bình dung nhan cam kết chứa dung môi đã có được bão hòa (pha động) để chạy nhan sắc ký. Trong bình nhan sắc ký kết pha động, sẽ dịch rời dọc theo bản mỏng tanh làm cho dịch chuyển các cấu tử của chủng loại demo theo một vận tốc không giống nhau tạo ra thành một sắc ký kết đồ gia dụng với nhiều lốt gồm thời gian lưu giữ (Rf) khác nhau. Quá trình này có cách gọi khác là khai triển nhan sắc ký hoặc chạy sắc đẹp ký kết.

Sau Khi khai triển trong bình sắc ký kết với làm khô dung môi, ta hoàn toàn có thể khẳng định được vị trí và diện tích của dấu bởi rất nhiều cách không giống nhau như: soi dưới đèn tử ngoại (đèn UV), đặt bản mỏng tanh vào buồng tương đối iot bão hòa hoặc phun dung dịch hiện nay color đặc hiệu nhằm lưu lại địa chỉ những lốt trên phiên bản mỏng dính.

Để thu được chất nghiên cứu và phân tích, tiến hành cạo vùng chất tiêu thụ cất vết thoát khỏi bạn dạng mỏng dính với phản dung nạp bọn chúng bởi một dung môi tương thích. Hợp hóa học thu được từ phiên bản mỏng tanh có thể được liên tiếp tinch chế bởi sắc đẹp ký kết lớp mỏng mảnh (TLC) tuyệt bởi các phương pháp sắc đẹp cam kết pha chế không giống. khi thích hợp hóa học này đã chiếm lĩnh độ tinc khiết cao tại mức nhất định, fan ta triển khai định tính, xác minh cấu tạo bởi những cách thức so sánh khác biệt hoặc bằng phép đo quang quẻ phổ. Trong thời điểm này địa thế căn cứ vào lúc độ tinh khiết có được, rất có thể sử dụng chúng nlỗi chất chuẩn chỉnh xuất xắc hóa học so sánh.

Kỹ thuật thực hiện sắc cam kết lớp mỏng điều chế tựa như nhỏng chuyên môn TLC. Nhưng để có hiệu suất cao hơn nữa trong sắc ký kết lớp mỏng mảnh pha chế, fan ta thường được sử dụng những bản mỏng mảnh trong dày hơn so với chuyên môn TLC. Các lớp mỏng mảnh đó thường có độ dày 0,5 - 2mm hoặc rất có thể dày đến 10 mm tùy mục đích nghiên cứu. Việc sử dụng những phiên bản mỏng tanh này tạo nên năng suất điều chế tăng thêm đáng kể.

1.2. Cách phát hiện tại lốt trong chuyên môn nhan sắc cam kết lớp mỏng dính điều chế

Soi UV

Sau Khi đem bạn dạng mỏng tanh đang thực hiện thoát ra khỏi bình nhan sắc cam kết, để thô tự nhiên hoặc sấy vơi rồi chuyển vào soi dưới ánh sáng đèn tử nước ngoài. Dưới ảnh hưởng của tia tử ngoại, các lốt đã thắp sáng. Ưu điểm của phương thức này là, nkhô nóng, thuận tiện, không xẩy ra hao hụt mẫu mã.

Nhược điểm của phương pháp này là, góc nhìn thấy vị trí biểu kiến không giống địa chỉ thực của vết dẫn tới sự việc xác xác định trí không nên. Để khắc chế, Lúc bội nghịch tiêu thụ người ta hay cạo vết rộng lớn ra để vấn đề thu hóa học triệt để rộng.

Phun dung dịch hiện tại color đặc hiệu

Dùng tnóng kính hoặc tnóng vật liệu bằng nhựa mỏng mảnh bịt phần đông phiên bản mỏng, sau thời điểm đã knhị triển và có tác dụng khô dung môi. Phun dung dịch hiện color quánh hiệu lên phần không xẩy ra che. Thuốc hiện tại màu đặc hiệu này đang chức năng với những hóa học cùng tạo màu sắc các vết bên trên bạn dạng mỏng mảnh. Căn cứ đọng vào địa chỉ những vết color hiện nay trên bạn dạng mỏng mảnh, sử dụng vẻ ngoài tương thích cạo phần lớp mỏng dính tương xứng ở đoạn bạn dạng mỏng mảnh bị bít để thu chất phân tích và thực hiện bội nghịch tiêu thụ. Ưu điểm của cách thức này là, khẳng định được vị trí đúng chuẩn của vệt.

Sử dụng hơi iod

Đặt phiên bản mỏng dính vào phòng hơi iod bão hòa cho tới khi lốt lộ diện. Lấy phiên bản mỏng manh thoát khỏi phòng iod. Đánh vệt địa chỉ lốt kế tiếp ptương đối bản ngoại trừ quạt gió để cất cánh hơi iod. Cạo bạn dạng mỏng mảnh ở trong phần diện tích S đánh dấu, phản bội hấp phụ để thu hóa học buộc phải nghiên cứu.

Ưu nhược điểm

Ưu điểm của phương pháp dung nhan ký lớp mỏng pha trộn là:

- Nkhô giòn, tốt, sản phẩm dễ dàng và đơn giản cùng dễ vận dụng hơn đối với sắc đẹp ký kết cột truyền thống và HPLC pha chế.

Xem thêm: Mâm Cúng Ngày Vía Thần Tài Đầy Đủ Gồm Những Gì? Lễ Vật Cúng Ngày Vía Thần Tài Gồm Những Gì

- Dễ tìm kiếm được dung môi tương thích để tách bóc tất cả hổn hợp các chất.- Sử dụng một lượng nhỏ dung môi.- Có thể triển khai các lần để thu được công dụng phân bóc tách xuất sắc hơn, tất cả độ tinc khiết cao hơn.- Dễ dàng phản tiêu thụ để lấy những hóa học đề nghị điều chế ra khỏi bản mỏng tanh.- Có thể thực hiện đồng thời những chất chuẩn vào và một điều kiện khẳng định giúp sinh sản thuận lợi cho câu hỏi khẳng định đúng theo hóa học mong muốn.Tuy nhiên nhược điểm của phương thức này là:- Các vừa lòng hóa học kỉm bền chấm trên bề mặt phiên bản mỏng mảnh có thể bị phân bỏ Lúc tiếp xúc cùng với không gian với tia nắng.- Trong những trường phù hợp tất cả sự lộ diện bên cạnh đó của tạp chất trong khi phản bội dung nạp nhằm thu hồi hóa học cần pha trộn.- Phải chạy trên những hệ dung môi để riêng biệt trong trường vừa lòng những chất có Rf tương tự nhau trong một hệ dung môi.

2. Sắc ký cột pha trộn (preparative sầu column chro-matography)

2.1. Ngulặng tắc

Phương pháp dung nhan ký cột pha chế nhờ vào sự phân bổ khác biệt của các chất thân pha động và pha tĩnh, được triển khai vào một ống chất thủy tinh trực tiếp (cột) với hóa học dung nạp nhập vai trò trộn tĩnh được nhồi vào cột. Dung môi rửa cột đóng vai trò pha cồn chảy qua hóa học dung nạp.

Đối với những chất cá biệt trong tất cả hổn hợp tùy theo tài năng hấp phụ và kỹ năng hài hòa của chính nó đối với dung môi cọ cột, hoàn toàn có thể lấy chúng ra trước hoặc sau.

Chất hấp phụ trong dung nhan ký cột thường là ôxýt nhôm, silicagel, CaCO3, than hoạt tính, polyamid. Các chất này đã có được tiêu chuẩn chỉnh hóa và gồm sẵn trên Thị phần.

2.2. Kỹ thuật sắc đẹp ký cột điều chế

Có 3 cách thức thực hiện dung nhan cam kết cột điều chế:

- Phương pháp chi phí lưu- Phương pháp cọ giải- Phương pháp cọ đẩy

Kỹ thuật triển khai những phương pháp này còn có không giống nhau rất nhiều. Ở phương thức chi phí lưu, fan ta khẳng định nồng độ những cấu tử trong dung dịch tan thoát khỏi cột với gây ra đồ gia dụng thị sự phụ thuộc vào của độ đậm đặc cấu tử vào thể tích dung môi chảy qua cột. Hay

phương pháp rửa giải, fan ta cho một thể tích dung dịch chứa tất cả hổn hợp nhị cấu tử (tất cả ái lực khác nhau đối với pha tĩnh trong cột) chảy qua cột. Còn trong phương pháp rửa đẩy, sau thời điểm gửi mẫu mã vào cột, người ta mang đến rã qua cột một hỗn hợp rửa đựng một chất tất cả ái lực với pha tĩnh lớn hơn những cấu tử đề nghị bóc. Song lý lẽ tầm thường của nhan sắc ký kết cột pha chế hầu hết phụ thuộc vào sự phân bố không giống nhau của những hóa học thân nhì pha rượu cồn với trộn tĩnh. Sự lặp đi tái diễn hiện tượng tiêu thụ - phản bội tiêu thụ của những hóa học lúc mẫu trộn đụng vận động qua pha tĩnh nhồi vào cột là bề ngoài đa phần của vấn đề bóc tách trong sắc đẹp cam kết cột.

Trong chuyên môn dung nhan ký cột pha trộn, các nguyên tố như chiều dài cột, 2 lần bán kính trong của cột, bản chất với cỡ hạt của trộn tĩnh nhồi vào cột, tính chất với vận tốc chảy của dung môi, ái lực của hóa học phân tích so với trộn tĩnh, kỹ thuật nhồi cột…. là những nguyên tố ra quyết định cho hiệu năng của phương pháp.

2.3. Các bước thực hiện dung nhan cam kết cột pha trộn

Nhồi cột.

- Chọn cột, làm thô cột;- Cân lượng pha tĩnh cần dùng khớp ứng với địa điểm của cột;- Pha dung môi chạy hệ;- Hòa tan trộn tĩnh vào dung môi đó vào một ly bao gồm mỏ;- Nhồi mặt dưới cột một tấm bông gòn để chặn pha tĩnh (không yêu cầu so với hầu như cột đã bao gồm sẵn miếng xốp xuất xắc thanh lọc chất thủy tinh nhằm ngăn trộn tĩnh);- Chuyển trộn tĩnh vào cột bằng cách khuấy trộn tĩnh trong dung môi (không phân cực) vẫn trộn sẵn rồi rót dìu dịu vào cột. Lúc rót, đề xuất mlàm việc khóa cột để trộn tĩnh lắng phần đa, lưu giữ nhằm bình hứng dưới nhằm thu hồi dung môi, thường xuyên làm như thế đến lúc gửi hết lượng pha tĩnh vào cột kế tiếp khóa cột lại.

Nạp chủng loại vào cột.

- Nếu nạp mẫu mã ướt (tất cả hổn hợp hóa học đối chiếu tung trong dung môi chạy cột) thì kết hợp chủng loại vào dung môi với bỏ vô cột.- Cách hấp thụ mẫu thô thực hiện như sau: Nếu mẫu mã ko tan trong dung môi chạy cột thì phải phối hợp chủng loại vào dung môi trung gian (dung môi này hài hòa được mẫu) trong một ly tất cả mỏ. Dùng một lượng trộn tĩnh cho vào cốc có mỏ trên để hấp phụ mẫu vào pha tĩnh. Sau Khi gửi vào bình cầu và chứa dưới áp lực nặng nề giảm để xua dung môi, đã thu được trộn tĩnh khô gồm đựng chủng loại. Lúc này nạp hết trộn tĩnh đó vào cột và cho thêm tiếp dung môi chạy cột vào.- Sau khi hoàn toàn bài toán hấp thụ chủng loại, lót 1 miếng bông gòn nghỉ ngơi bên trên cột nhằm ổn định hệ rồi liên tiếp cho dung môi vào cột.- Mlàm việc khóa, từ bây giờ vào cột ban đầu bóc tách chất, hứng lượng dung môi rã ra bao gồm hẳn nhiên chất đã tách bóc được bởi ống nghiệm nhỏ dại, những lần hứng khoảng 1/3 ống nghiệm. Sau đó, mang chấm trên phiên bản mỏng. Những ống gồm vệt giống như nhau sẽ tiến hành gom lại, đó là 1 trong những hóa học. Tiếp tục làm cho điều này cùng sau cùng ta vẫn bóc được những chất mong ước.Dùng khóa cột để điều chỉnh tốc độ loại chảy dung môi, do vận tốc tung của dung môi đưa ra quyết định quá trình bóc tất cả giỏi hay là không. Nếu vận tốc tan chậm rì rì thì đề nghị đợi chờ, tung nkhô giòn thì trộn tĩnh còn chưa kịp hấp phụ đã bắt buộc rã ra, điều đó hóa học sẽ không còn tách bóc ra được.

Pha rượu cồn vào sắc đẹp ký cột điều chế

khi khảo sát điều tra trộn động trong dung nhan ký cột điều chế, điều đặc trưng là chọn lựa được một dung môi hoặc tất cả hổn hợp dung môi tương xứng độc nhất nhằm rất có thể tách bóc những cấu tử chất nên bóc tách vào thời gian nđính độc nhất vô nhị cùng sử dụng không nhiều dung môi duy nhất.

Trong sắc đẹp ký kết cột pha chế, tín đồ ta thường sử dụng tất cả hổn hợp dung môi. Vì vậy, Việc trộn lẫn Tỷ Lệ dung môi thế như thế nào nhằm quá trình tách phân tách rất tốt rất cần được quan tâm.

Việc sử dụng những các loại dung môi tinch khiết, dung môi gồm độ sôi rẻ nhằm dễ dàng thu hồi, dung môi bao gồm độ nhớt rẻ nhằm rời áp lực nặng nề lên cột nhồi là những yếu tố yêu cầu xem xét trong nhằm tăng tính năng của nghệ thuật sắc ký kết cột pha chế.

2.4. Cách vạc hiện trong dung nhan cam kết cột điều chế

UV detector: Trong sắc đẹp ký cột điều chế phương pháp ghi thừa nhận sắc đẹp cam kết đồ gia dụng bằng detector UV hay được sử dụng các tốt nhất. UV detector áp dụng được cho những hợp hóa học có nhân thơm, bao gồm nối đôi phối hợp, nhóm carbonyl, bao gồm đựng iod, brom, sulfur,…

Refractive detector: Cơ sở của phân phát hiện nay là địa thế căn cứ vào chỉ số khúc xạ. Phát hiện tại bởi refractive sầu detector Mặc dù có độ nhạy cảm thấp hơn so với bộ phạt hiện tại UV tuy nhiên nó xuất xắc được ứng dụng trong dung nhan cam kết cột điều chế. lúc chắt lọc dung môi, nhờ vào chỉ số khúc xạ để chắt lọc được nhiều loại dung môi làm sao gồm kết quả tách tối đa.

3. HPLC pha trộn (preparative high perfornace liquid chromatography)

3.1. Nguim tắc

Pmùi hương pháp bóc những chất bởi HPLC pha chế dựa vào trạng thái cân bằng thân các yếu tắc chất tiêu thụ trong cột (pha tĩnh) với dung môi tan qua nó (pha động).

khi một thành phần links với trộn tĩnh, kia là sự việc dung nạp, khi nhân tố này bị bóc thoát khỏi các thành phần hỗn hợp nhờ vào trộn cồn, kia là sự việc bội phản tiêu thụ. Khả năng hấp phụ cao giữa các yếu tắc hóa học nghiên cứu với pha tĩnh đó là tài năng gìn giữ các yếu tắc này bên trên cột lâu dài hơn. Vì vắt, yếu tố đó sẽ tiến hành cọ giải thoát ra khỏi cột chậm rãi rộng những nhân tố khác. do đó, câu hỏi bóc tách riêng rẽ những chất xuất phát từ một lếu hóa học nghiên cứu và phân tích chỉ hoàn toàn có thể tiến hành so với các hóa học có chức năng dung nạp không giống nhau so với trộn tĩnh với phần dung nạp đối với pha hễ.

Xem thêm: Mẹ Sau Sinh Nên Ăn Gì Để Mát Sữa Cho Con Bú Mau Tăng Cân, Mẹ Ăn Gì Để Sữa Mẹ Đặc, Mát, Con Tăng Cân

HPLC pha chế là 1 trong cách thức tác dụng với đang rất được áp dụng cực kỳ thịnh hành để bóc tách những chất buộc phải nghiên cứu và phân tích ra khỏi một các thành phần hỗn hợp hoặc nhằm tinh chế những chất.